17.07.2020 |
Nakano S, Tomaru Y, Kubota T, Takashe H, Mochizuki M, Shimizu N, Sugita S, on behalf of the Strip PCR Project Group
בדיקת Multiplex Strip PCR עבור דלקת ענביה זיהומית
תקציר: פרופ' מרדכי רוזנר
לעיתים שכיחות קשר לאבחן מחלות זיהומיות בעין כיון שהן נגרמות על ידי מנעד רחב ביותר של פתוגנים.
למרות שבדיקת PCR כמותית (quantitative polymerase chain reaction - qPCR) הינה השיטה הסטנדרטית לבדיקת האטיולוגיה, היותה מסובכת וחוסר פרוטוקול סטנדרטי מונעים שימוש נרחב.
החוקרים פיתחו בדיקת PCR בזמן אמת (real-time PCR) סטנדרטית ונוחה שתשתווה לבדיקת PCR כמותית ביכולתה לזהות את הפתוגנים העיקריים של מחלות זיהומיות של העין, עם קיט (Kit) שיאפשר תוצאות עקביות במעבדות שונות ועל ידי משתמשים שונים ובקלות יחסית.
זוהי multiplex real-time PCR test (Strip PCR) לזיהוי של 24 פתוגנים. היתרונות של מולטיפלקס סטריפ PCR כוללים דרישות מופחתות מבחינת גודל הדגימה, זמן ביצוע, ועלות הראגנטים. שיטה זו מאפשרת לקבל תוצאות חצי-כמותיות (semiquantitative) ללא DNA סטנדרטי, המשתוות לאלה של PCR סטנדרטי.
כדי להשוות את השיטות הן בוצעו על ידי אנשים עם כישורים ניסיון שונה בביצוע בדיקות PCR ומרכזים רפואיים רבים ובוצע אימות (validation) של הסטריפ PCR עבור אובאיטיס זיהומית.
החוקרים היו מיפן, ממחלקות עיניים, מרכזים רפואיים ואוניברסיטאות לרפואת שיניים ולרפואה ב- Yufu, טוקיו, Miyakonojo, ו- Kobe. נבדקו 722 דגימות ב- 14 מכונים. דגימות ממי הלשכה ומהזגוגית נבדקו באמצעות PCR כמותי ועל ידי סטריפ PCR. המשתנים האבחנתיים של בדיקות הסטריפ PCR הושוו לתוצאות של PCR כמותי.
התוצאות הדגימו שונות נמוכה בתוך אותם מרכזים ובין מרכזים שונים גם כאשר בוצעה על ידי טכנאים בעלי ניסיון שונה בביצוע בדיקות PCR.
המטרות של הסטריפ PCR עברו אופטימיזציה עבור 9 פתוגנים: הרפס וירוס 1, הרפס וירוס 2, וריצלה זוסטר, human T-cell lymphotropic virus 1, הרפס וירוס הומני 6, אפשטיין-בר, ציטומגלווירוס, טוקסופלסמוזה גונדי, וטרפונמה פלידום. ב- 772 דגימות תוך עיניות הסטריפ PCR אבחן בהצלחה פתוגן DNA ב- 252 מתוך 255 המקרים עם תשובות חיוביות בבדיקה של PCR כמותי, ותשובות שליליות היו עבור כל 191 הדגימות עם תשובות שליליות בבדיקה של PCR כמותי.
לסטריפ PCR היו רגישות גבוהה יותר (98.8 אחוז), ספציפיות גבוהה יותר (98.5 אחוז), ערך מנבא חיובי (98.8 אחוז), וערך מנבא שלילי (98.5) בהשוואה ל- PCR כמותי.
נמצאה התאמה גבוהה בין תוצאות הסטריפ PCR לבין אלה של ה- PCR הכמותי ושל האבחנה הקלינית.
החוקרים ממליצים להשתמש בסטריפ PCR הקל לשימוש לאבחנה מהירה של דלקת ענביה זיהומית, כי תוצאותיו משתווים לאלה של PCR כמותי.